Такого
рода искажения, связанные с химическими реакциями в колонке, могут быть
несколько снижены понижением температуры колонки, однако в большинстве случаев
оказывается необходимой замена твердого носителя или самой колонки материалом,
более инертным в химическом отношении.
Для
анализа этого случая мысленно заменим реальную химически активную на всем
протяжении колонку гипотетической колонкой с наполнителем, не вызывающим
никаких химических превращений.
Резкая
зависимость скорости химических процессов и их характера от температуры
подсказывает способ простейшего испытания: снижение температуры испарителя и
колонки на 30-50°, как правило, приводит к резкому уменьшению высот ложных
пиков, мало изменяя форму пиков, соответствующих реально существующим
компонентам анализируемой смеси.
Приведенные
данные о газовой хроматографии с программированием температуры, естественно,
составляют лишь часть сведений, касающихся этого весьма нового и чрезвычайно
быстро развивающегося способа хроматографического анализа в газовой фазе.
В
частности, по температурам удерживания исследуемого вещества и двух парафинов
может быть вычислен индекс Получаемые значения индексов обычно совпадают с
величинами, определяемыми из изотермических удерживаемых объемов при
температуре, несколько более низкой.
Для
нелинейного изменения температуры расчет температур удерживания и удерживаемых
объемов в большинстве случаев возможен только с применением
электронно-вычислительных машин.
Кривая
зависимости этой площади от температуры при выбранном значении начальной
температуры программирования называется характеристической кривой процесса.
Значение интеграла, отложенное по оси ординат, представляет собой программу, т.
е. отношение скорости нагрева к скорости газа.
При
рассмотрении процесса газовой хроматографии с программированием температуры
можно исходить из того, что хроматографическая зона в колонке за время пройдет расстояние, определяемое уравнением:
где V - удерживаемый объем, поэтому отношение определяет объем газа,
необходимый для того, чтобы зона прошла единицу длины колонки.
Самым
простым приемом является двукратное проведение хромато-графического процесса.
При первом опыте выбирают температуру, обеспечивающую получение четкой
хроматограммы наиболее поздно выходящих компонентов.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
