К
детекторам подобного типа относятся пламенный ионизационный и аргоновый
детекторы, широко распространенные в настоящее время. Важной особенностью этих
детекторов является независимость результирующей площади хроматографического
пика от скорости газа-носителя.
Прежде
всего вследствие изменения напряжения источников питания, изменения
электрических параметров самого детектора и обслуживающих систем, а также под
влиянием многих других факторов происходит некоторое постоянное изменение
величины нулевого сигнала, обычно довольно медленное.
Однако
существует ряд аналитических задач, которые
значительно проще и изящнее могут быть решены при использовании
селективных детекторов. В качестве примера можно указать на применение
электроннозахватного детектора для
определения малых количеств антидетонаторов в бензине,
определение следов пестицидов и других ядов в пищевых продуктах и биологических
объектах, анализ стероидов и 1. п.
Помехоустойчивость детектора в значительной
мере определяет пределы его чувствительности, удобство работы с ним и во многих
случаях служит критерием выбора детектирующей системы.
Весьма
существенно, чтобы детектор достаточно быстро реагировал на изменение
концентрации или количества разделяемых веществ в газе-носителе, т. е. имел
достаточное быстродействие. Недостаток быстродействия детектора очень сильно
сказывается на анализе быстро выходящих из колонки компонентов.
Все
сказанное справедливо и в том случае, когда в отсутствие каких-либо химических
процессов имеет место повышенный унос жидкой фазы вследствие высокой упругости
ее паров при рабочей температуре.
Такого
рода искажения, связанные с химическими реакциями в колонке, могут быть
несколько снижены понижением температуры колонки, однако в большинстве случаев
оказывается необходимой замена твердого носителя или самой колонки материалом,
более инертным в химическом отношении.
Для
анализа этого случая мысленно заменим реальную химически активную на всем
протяжении колонку гипотетической колонкой с наполнителем, не вызывающим
никаких химических превращений.
Резкая
зависимость скорости химических процессов и их характера от температуры
подсказывает способ простейшего испытания: снижение температуры испарителя и
колонки на 30-50°, как правило, приводит к резкому уменьшению высот ложных
пиков, мало изменяя форму пиков, соответствующих реально существующим
компонентам анализируемой смеси.
Приведенные
данные о газовой хроматографии с программированием температуры, естественно,
составляют лишь часть сведений, касающихся этого весьма нового и чрезвычайно
быстро развивающегося способа хроматографического анализа в газовой фазе.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.