Центрифугат

Далее в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с  10,4, после чего ко второй пробе прибавляют 0,5 мл раствора субстрата.

Интенсивность окраски измеряют на фото электроколориметре с фильтром или на спектрофотометре при длине волны 550 ммк и выключатели. Количество фенолфталеина в пробе определяется по калибровочной кривой, построенной на основании анализа различных по концентрации растворов фенолфталеина (5-60 мкг). Количество фенолфталеина в пробе, освобождающегося в результате гидролиза, характеризует ферментативную активность исследуемого препарата глюкуронидазы. По Fishman, единицей активности фермента можно считать такую активность, когда при воздействии на фенолфталеинглюкуронид отщепляется 1 мкг фенолфталеина за 1 час при рН 4,5 и температуре 38°. Фенолфталеинглюкуронид получают из мочи кроликов, которым предварительно внутримышечно вводится фенолфталеин.

Отечественный препарат глюкуронидазы уже в течение нескольких лет с успехом используется в ряде лабораторий Советского Союза для анализа конъюгатов стероидных гормонов.

Одной из наиболее интересных работ по определению кортикостероидов в биологическом материале методом газо-жидкостной хроматографии является статья Bailey.

Автору удалось определить содержание основных природных глюкокортикоидов (кортизола и кортизона) и некоторых их синтетических аналогов  в моче после экстракции указанных химических соединений, выделения их посредством бумажной хроматографии в виде четырех фракций, окисления анализируемых веществ висмутатом натрия с последующим их количественным определением методом газовой хроматографии.