Следует
иметь в виду, что носитель, полностью инертный при разделении одной группы
веществ, может проявить значительную химическую активность при переходе к
анализу другой группы объектов.
Снижение
скорости газа в 3-5 раз позволяет увеличить эффективность примерно вдвое - до
150-200 т. т./м, причем время анализа и температура колонки остаются на уровне,
свойственном наполненным колонкам.
Количество
вещества, которое может быть разделено на капиллярной колонке, в силу ее малого
сечения и малого количества жидкой фазы значительно меньше, чем в случае
наполненной колонки.
Выполнить
эти требования можно только в том случае, если материал, из которого выполнен
капилляр, обладает очень малой адсорбционной способностью, легко смачивается
жидкостью, являющейся неподвижной фазой, позволяет получить капилляр
достаточной длины с диаметром, равномерным по всей длине в пределах
нескольких процентов, отличается
достаточной термической стойкостью и химической стабильностью при температуре
разделения и не проявляет заметной каталитической активности.
Применяя
колонки длиной 20-50 м и более, диаметром 10-12 мм, заполненные наполнителем при 10-15% жидкой фазы, Verzele получил
эффективность до 2000 т. т. при разделении проб объемом до 2-3 мл.
Увеличение
количества разделяемой пробы без вызванного перегрузкой колонки снижения
эффективности возможно лишь при соответствующем увеличении ее сорбционной
емкости. Последняя может быть повышена путем увеличения количества жидкой фазы
и увеличения сечения колонки.
Колонка
заполняется наполнителем, представляющим собой инертный твердый носитель,
покрытый тонкой пленкой жидкой фазы. Содержание жидкой фазы составляет от 0,1
до 45-50% к весу носителя.
При
попадании в пространство между электродами атомов и молекул с большим сродством
к электрону (галоиды, металлорганические соединения) происходит захват
электронов и резкое снижение тока.
Одновременно
было замечено, что эти показания в большей степени, чем у других детекторов,
зависят, с одной стороны, от структурных особенностей вещества, с другой
- от деталей конструкции детектора: формы и размеров электродов, расстояния
между ними, конфигурации выходного отверстия горелки и т. п.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
