При
прочих равных условиях чувствительность катарометра растет пропорционально
третьей степени тока накала. Очень выгодным, с точки зрения повышения
чувствительности, является применение в качестве рабочих элементов кагарометров
термисторов, так как величины R0 и а у них на несколько порядков больше, чем у
нагретых проволок.
При
малом молекулярном весе газа-носителя и
больших молекулярных весах определяемых соединений коэффициенты, близки к 1, т.
е. показания детектора мало зависят от молекулярных весов детектируемых
соединений.
Полярография. Применение полярографической
ячейки для детектирования позволяет получить интегральный детектор, по своей
чувствительности значительно превышающий другие детекторы этой группы.
Эти
детекторы обычно имеют небольшую чувствительность и большое время запаздывания
(несколько секунд). Достоинством их является высокая помехоустойчивость и
простота конструкции.
В
следующем разделе мы рассмотрим различные типы детектирующих систем, принципы и
особенности их работы и, наконец, методы расчета соответствующих поправочных
коэффициентов.
Таким
образом, с применением внутреннего стандарта можно определять, например,
содержание воды в смеси органических веществ (при использовании пламенного
детектора), наличие смолы, солей и т. п.
В медико-биологических исследованиях метод
абсолютной калибровки оказывается незаменимым лишь в редких случаях. К ним
может относиться, например, определение малых концентраций веществ в сочетании
с нерегистрируемыми детектором компонентами.
Естественно,
что при этих условиях пик основного компонента не гложет быть записан на
диаграмме полностью. Кроме того, искажение формы пика, связанное с перегрузкой
колонки, затрудняет определение его площади расчетными методами и не позволяет
воспользоваться методом нормализации.
Все
взвешивания выполнялись на аналитических весах. При этом удалось добиться
точности определения калибровочных коэффициентов порядка 2 отн.%. В тех
случаях, когда это возможно, желательно контролировать состав смеси химическими
или спектральными методами.
Экспериментальное
определение калибровочных коэффициентов может проводиться двумя основными
способами. Первый из них заключается в том, что в хроматограф вводят точно
известные количества определяемых веществ и находят зависимость площади
получающегося пика от абсолютного количества введенного в колонку вещества.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
