По аналогии с процессом ректификации, внешне
напоминающим газо-жидкостную хроматографию, число таких переходов считают мерой
эффективности колонки и называют его числом теоретических тарелок (ЧТТ).
Для
анализа в большинстве случаев оказывается вполне достаточной степень
разделения, равная 0,50-0,70. Обычно степень разделения, равная, соответствует
полному разделению пиков. При дальнейшем увеличении между пиками появляется участок нулевой линии.
Сравнение
времен удерживания и изучение зависимостей между особенностями строения и
хроматографическими параметрами вещества не исчерпывают возможные способы
идентификации пиков на хроматограмме.
Сопоставление
удерживаемых объемов на двух различных жидких фазах часто оказывает
существенную помощь при идентификации неизвестных пиков. Два соединения,
принадлежащие к различным гомологическим рядам и имеющие на одной жидкой фазе
близкие удерживаемые объемы, на другой фазе могут различаться сильнее
вследствие различий в величинах АЯ или постоянной, связанной с энтропией
растворения.
С большой степенью достоверности можно считать, что функциональные группы,
определяющие природу гомологического ряда, не изменяют характера групп,
отстоящих более чем на 2-3 атома углерода.
При
той же температуре кипения удерживание ароматических соединений может быть в
1,2-1,6 раза выше, в зависимости от характера, чем у алициклических с теми же
функциональными группами жидкой фазы.
Ниже
вкратце рассмотрены некоторые примеры наблюдаемых экспериментально зависимостей
между удерживанием органических соединений и наличием в их молекуле тех или
иных структурных элементов.
Здесь
концентрации вещества, соответственно, в
жидкой и газовой фазах, а объемы этих
фаз в колонке. Эта величина равна произведению коэффициента распределения на
отношения объемов жидкой и газовой фазы в колонке.
Индексы
других стероидных соединений вычисляют интерполяцией логарифмов объемов
удерживания. Большое различие в летучести стандартов, соответствующее изменению
массы молекулы на 8 атомов углерода, приводит к относительно низкой точности
определения стероидных чисел.
Шкала
индексов Ковача линейна во всем диапазоне, исключая небольшую область ниже 200.
Величина их зависит только от природы неподвижной жидкой фазы и даже
температура оказывает на нее относительно малое влияние.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
