Для
смеси с большим диапазоном температур кипения можно достичь одинаковой точности
определения площади всех пиков только при использовании хроматографии с
программированием температуры.
Отклонения
хроматографических пиков от кривой Гаусса чаще всего связаны с нарушением
симметрии пика. В работах Bartlet и Smith, Smith и Bartlet экспериментально
показано, что при незначительной асимметрии пиков в тех случаях, когда
геометрическое место середин горизонтальных хорд (осевая линия пика) является
прямой линией, для определения площади.
Этот
способ требует обязательного копирования хроматограммы, так как в противном
случае она уничтожается. Следует отметить, что точность обоих рассмотренных
способов существенным образом зависит от субъективных факторов.
Площадь
пика определяется количеством вещества значительно более однозначно, она
сравнительно мало зависит от температуры колонки, не изменяется при изменении
скорости испарения, а также не зависит от эффективности колонки и времени
пребывания вещества в ней.
К
детекторам подобного типа относятся пламенный ионизационный и аргоновый
детекторы, широко распространенные в настоящее время. Важной особенностью этих
детекторов является независимость результирующей площади хроматографического
пика от скорости газа-носителя.
Прежде
всего вследствие изменения напряжения источников питания, изменения
электрических параметров самого детектора и обслуживающих систем, а также под
влиянием многих других факторов происходит некоторое постоянное изменение
величины нулевого сигнала, обычно довольно медленное.
Однако
существует ряд аналитических задач, которые
значительно проще и изящнее могут быть решены при использовании
селективных детекторов. В качестве примера можно указать на применение
электроннозахватного детектора для
определения малых количеств антидетонаторов в бензине,
определение следов пестицидов и других ядов в пищевых продуктах и биологических
объектах, анализ стероидов и 1. п.
Помехоустойчивость детектора в значительной
мере определяет пределы его чувствительности, удобство работы с ним и во многих
случаях служит критерием выбора детектирующей системы.
Весьма
существенно, чтобы детектор достаточно быстро реагировал на изменение
концентрации или количества разделяемых веществ в газе-носителе, т. е. имел
достаточное быстродействие. Недостаток быстродействия детектора очень сильно
сказывается на анализе быстро выходящих из колонки компонентов.
Все
сказанное справедливо и в том случае, когда в отсутствие каких-либо химических
процессов имеет место повышенный унос жидкой фазы вследствие высокой упругости
ее паров при рабочей температуре.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
