В
исследовании Zaasberg и Etstein (1965), посвященном газохроматографическому
определению циклопропана в цельной крови, также описана так называемая прямая
инъекционная техника для быстрого и точного анализа летучих веществ в пробах
крови малого объема (порядка 10 мкл) с использованием стеклянной инъекционной
камеры с дополнительным ее подогревом.
В
результате удалось довести технику газохроматографического определения до
возможности практически ежеминутно производить количественный анализ ряда
анестетиков, таких, как метоксифлуран, галотан, циклопропан, хлороформ и
некоторых других в плазме, эритроцитах и цельной крови, а также в различных
тканях организма человека.
Исследования
проводились главным образом на хроматографах, снабженных
пламенно-ионизационными детекторами. Хорошая стабильность работы приборов
наблюдалась при одинаковых потоках водорода и азота.
Разделение,
например, было осуществлено Gloesener, Lapiere и Versie (1958) методом
газо-жидкостной хроматографии на двусекционной колонке, наполненной
последовательно твердым парафином и силиконом или соответственно
триэтаноламином и силиконом.
Определение
производилось на хроматографе фирмы Весктап (США), модель, снабженном
детектором по измерению теплопроводности. Температура детектора и колонки 130°.
Точность определения ±5%.
Авторами
приводится также описание специально сконструированного приспособления,
позволяющего извлекать указанные вещества из 1 мл крови непосредственно перед
введением их в хроматограф.
Следует
подчеркнуть, что в настоящее время газовая хроматография практически является
единственным методом исследования, позволяющим одновременно производить и
получать результаты определения газовой смеси, состоящей из двух и значительно
большего числа компонентов.
При
проведении медико-биологических исследований особое значение имеет измерение
радиоактивности как собранных фракций, так и непосредственно хроматографических
зон в газовом потоке. Однако объем настоящей книги не позволяет уделить должное
внимание этому вопросу.
Сходные
результаты могут быть получены при работе с охлажденными ловушками, имеющими
внутри проволоку, нагреваемую электрическим током. Такие приемы осуществляются
в специальных приборах для препаративной хроматографии.
Выталкиваемый
при этом в испаритель дозирующий капилляр разламывается на отрезки длиной менее
2-3 мм, что увеличивает скорость испарения. Раздробленные капилляры остаются в
испарителе, причем ввод 300-500 проб еще не вызывает необходимости в его
очистке.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
