Существенный
интерес, на наш взгляд, представляет также возможность практического изучения и
определения биосинтеза высших жирных кислот (насыщенных и ненасыщенных) в
листьях растений, выполненных при помощи газовой хроматографии James (1963).
Анализу
карбоновых кислот, а также низко- и высокомолекулярных соединений как
природных, так и синтетических посвящено исследование Gehrke и Goerlitz (1963).
Жирные
кислоты, содержащие в своем составе более 10 углеродных атомов, относятся к
высшим жирным кислотам. В липидах человека преимущественно содержатся высшие
жирные кислоты с длиной углеродной цепи.
При
длительном алиментарном перерыве или существенном недостатке поступления жиров,
особенно ненасыщенных жирных кислот, в организме млекопитающих возникает ряд
патологических расстройств, в частности поражения кожи, заболевания почек,
нарушения половой функции, замедление роста и т. п.
Помимо
этого и некоторых других преимуществ, определение состава газовой смеси методом
газовой хроматографии занимает во много раз меньше времени, а при четко
отработанной методике позволяет производить значительно большее количество
анализов, чем по манометрическому методу ван Слайка.
Изучавшийся
круг вопросов требовал одновременного определения четырех газов (неона,
кислорода, окиси углерода и ацетилена), для чего в свое время использовались
четыре газовых анализатора, каждый из которых был приспособлен и обеспечивал
определение в газовой смеси концентрации одного из указанных выше компонентов.
В
исследовании Zaasberg и Etstein (1965), посвященном газохроматографическому
определению циклопропана в цельной крови, также описана так называемая прямая
инъекционная техника для быстрого и точного анализа летучих веществ в пробах
крови малого объема (порядка 10 мкл) с использованием стеклянной инъекционной
камеры с дополнительным ее подогревом.
В
результате удалось довести технику газохроматографического определения до
возможности практически ежеминутно производить количественный анализ ряда
анестетиков, таких, как метоксифлуран, галотан, циклопропан, хлороформ и
некоторых других в плазме, эритроцитах и цельной крови, а также в различных
тканях организма человека.
Исследования
проводились главным образом на хроматографах, снабженных
пламенно-ионизационными детекторами. Хорошая стабильность работы приборов
наблюдалась при одинаковых потоках водорода и азота.
Разделение,
например, было осуществлено Gloesener, Lapiere и Versie (1958) методом
газо-жидкостной хроматографии на двусекционной колонке, наполненной
последовательно твердым парафином и силиконом или соответственно
триэтаноламином и силиконом.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
