Щелочные экстракты

Методика в основном заключается в гидролизе связанных с глюкуроновой кислотой стероидов глюкуронидазой, экстракции, предварительном выделении стероидов в тонком слое окиси алюминия, переводе прегнандиола, прегнантриола и прегнантриолона в триметилсилиловые эфиры и определении полученных производных методом газо-жидкостной хроматографии. Используя такого рода методику, авторы добились определения этих стероидных соединений в количестве до 20 мкг в суточной моче. Указанная методика была применена при обследовании здоровых лиц, беременных женщин и больных некоторыми эндокринными заболеваниями.

Для определения бралась моча в количестве от 10 до 30 мл. Определение прегнандиола требовало ферментативного гидролиза в течение 24 часов, определение прегнантриола и прегнантриолона - гидролиза в течение 2 суток.

Экстракция мочи (после гидролиза) производилась трижды 35 мл дихлорметана. Эмульгирование устранялось центрифугированием в течение 10 минут при 2000 об/мин. Охлажденный дихлорметановый экстракт дважды промывался 25 мл 1 н. раствора гидроокиси натрия, а потом дистиллированной водой до нейтральной реакции. Растворитель удалялся высушиванием в вакууме над безводным сульфатом натрия. Перед нанесением стероидного экстракта на тонкий слой адсорбента стеооиды растворялись в   хлористый метилен .

Хроматографирование производилось в системах растворителей этанол-бензол 1 :6 и этанол-бензол 1 :8.

Первая система растворителей обеспечивает отделение 17-кетостероидов от метаболитов прогестерона, последующее хроматографирование во второй системе растворителей позволяет отделить прегнандиол от прегнантриола и прегнантриолона.