Так,
при двукратном хроматографировании в смеси эфир-гексан эстрадиол и эстрон находятся вблизи линии
фронта, а эстриол, кортизон, кортизол, кортикостерон и преднизон остаются на
линии старта.
Исследование стероидов возможно только на
приборах, снабженных высокочувствительными ионизационными детекторами. Наиболее
подходящими для работы со стероидами вообще и в биологических объектах, в
частности, являются аргоновый ионизационный, ионизационно-пламенный и детектор
по захвату электронов.
Дополнительные
сведения по предварительному выделению жирных кислот из биологических
объектов, переводу их в
соответствующие производные и непосредственному разделению методом газовой
хроматографии содержатся в ряде других работ, также опубликованных в
периодической печати.
В
качестве иллюстрации приводим данные по определению высших жирных кислот в
форме их метиловых эфиров у больной, страдающей холецисто-панкреатитом и сахарным
диабетом, у мальчика 13 лет, больного диффузным гломерулонефритом, у больной,
оперированной по поводу флеботромбоза показан анализ высших жирных кислот из
фракции эфиров холестерина (после выделения указанной фракции посредством тонкослойной
хроматографии на силикагеле) у больного пиелонефритом.
Продолжительность
газохроматографического анализа 20 минут. Полученное разделение можно признать
вполне удовлетворительным, поскольку при указанных условиях получена
возможность разделения всех приведенных выше кислот, включая стеариновую,
олеиновую, линолевую и линоленовую, содержащих одинаковое число углеродных
атомов.
Состав
жирных кислот в менингиоме и невриноме оказался в основном идентичным составу
жирных кислот в опухолях, исходящих из гили, отличаясь лишь меньшим содержанием
в первых пальмитолеиновой кислоты.
Продолжается изучение жирных кислот в плазме крови здоровых людей и лиц, страдающих атеросклерозом. В частности, Luna и др. (1963). обследовали в этих целях 10 больных атеросклерозом и гипертонической болезнью.
Некоторые
приемы при анализе липидов, экстрагированных из стенок артерий человека,
приведены в работе Bottcher и др. (1959). Анализ метиловых эфиров жирных кислот
производился при температуре 198° (неподвижные
фазы: апиезокы, реоплекс, сополимеры кислот и гликолей, например, адипиновой и
малеиновой кислот и этиленгликоля).
В
литературе имеются также отдельные работы по изучению метаболизма фосфатидов
(Kogl с сотрудниками, 1960, и др.). Газохроматографическому разделению и
идентификации фосфатидов посвящена большая обзорного характера работа Marinetti
(1962).
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
