Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
Авторами
показано, что введение АКТГ у обследованных лиц приводило к повышенному
выделению указанных стероидных соединений с мочой. Если при нормальной
адренокортикальной активности, по данным авторов, нужно было обработать 20-80
мл мочи, го при повышенной функции коры надпочечников и, следовательно, при
повышенной уроэкскреции стероидных гормонов и их метаболитов для получения
достаточной концентрации стероидов в мочевых экстрактах достаточно было всего
от 4 до 25 мл мочи.
В
этой связи мы, так же как Horning, VandenHeuvel и Creech (1963), считаем
неправильным утверждение Chen и Lantz (1960) о возможности непосредственного
количественного определения кортизола без его предварительного перевода в одно
из достаточно термо стабильных производных.
По
мнению автора, характер температурной декомпозиции кортизола, кортизона и
других близких им стероидных соединений и их переход в соответствующие
17-кетостероиды зависит от наличия и количества окси- и гидрокситрупп, которые
они содержат.
Суточная
моча доводится уксусной кислотой.
Гидролиз ферментативный с инкубацией в течение 72 часов при температуре 37°.
Далее мочи доводится до 1,0 раствором
серной кислоты и проводится продолжительная экстракция порциями эфира по 250 мл
(на протяжении 48 часов).
Анализ
стероидов производился на хроматографе, снабженном аргоновым ионизационным детектором,
содержащим, при температуре колонки 197-206°, испарителя - 276-285-295°,
детектора - 223-240°, потоке аргона 55-60 мл/мин, напряжении на детекторе 900 в
и чувствительности 3 X 108 а.
Предварительно
авторами было произведено исследование меры экстракции фенолстероидов из водных
растворов с различным содержанием эстрона, эстрадиола и эстриола в последних.
В определенных случаях избавиться от наркотической зависимости помогает медикаментозное кодирование. При кодировании в организм наркозависимого пациента вводят противоядие, которое действует длительный период. Это такой же действенный метод, как и кодирование по методу Довженко, хотя принципы лечения отличаются существенно.
Вот
почему тщательное и всестороннее изучение функционального состояния коры
надпочечников, а также других желез внутренней секреции, продуцирующих
важнейшие стероидные соединения, является чрезвычайно важным и представляет не
только научный, но и принципиальный практический интерес.
Указанные
обстоятельства стимулируют разработку и применение новых методов исследования,
таких, как масс-спектрометрия, спектроскопия и газовая хроматография. Первые
два метода связаны с необходимостью иметь весьма дорогостоящее оборудование при
значительной трудности его эксплуатации и сложности интерпретации полученных
результатов.
Помимо
перечисленных, стероидный анализ методом газо-жидкостной хроматографии возможен
и производится на фазах и некоторых
других. Приготовление набивок для хроматографических колонок целесообразно
производить по наиболее употребительной методике Horning, Moscatelli и Sweeley
(1959) или по одной из методик, описанной в первой части настоящей работы.
Разделению
сложных смесей стероидов и желчных кислот методом газовой хроматографии
посвящено исследование Bloomfield (1962), в котором изложена методика и описано
ее применение как для качественного, так и для количественного анализа этих
соединений в фекальных экстрактах.
Для
удобства ознакомления с материалом последний соответственно распределен по
основным группам стероидных соединений - кортикостероидам (преимущественно
глюкокортикоидного ряда), эстрогенам и андрогенам, а также применительно к
общим вопросам, имеющим самое непосредственное отношение к физико-химическим аспектам
обсуждаемой проблемы.
Данные,
полученные указанными авторами, являются до настоящего времени одними из
наиболее полных и интересных из числа опубликованных в зарубежной литературе и
содержат сведения по всем основным этапам определения стероидных гормонов в
биологических объектах.
Patti
с сотрудниками (1963) для отделения кортикостероидов от 17-кетостероидов и для
очистки экстрактов предпочитают пользоваться колонками с флоризилом и окисью
алюминия.
Учитывая
только что сказанное, при работе со стероидами мы поступали следующим образом.
В случае необходимости, особенно при налаживании и отработке различных
вариантов обнаруживания кортикостероидов на пластинках, УФ свет применяли
только для качественного анализа.
Далее
в обе пробирки добавляют 4,4 мл ацетатного буфера с рН 4,5 и термостатируют в
течение часа при температуре 38°. Для прекращения реакции пробирки из
термостата извлекают и в них добавляют по 5 мл глицинового буфера с 10,4, после чего ко второй пробе прибавляют
0,5 мл раствора субстрата.
