Исследование обратимости денатурации

Одним из наиболее обычных препятствий на пути возвращения денатурированного белка в исходное нативное состояние является агрегация денатурированных молекул; она приводит к коагуляции или желатинизации раствора. В этих случаях для ренативации белка приходится, после удаления денатуратора, дезагрегировать белок или сдвигом рН в ту или иную сторону от изоэлектрической точки, или пептизировать его растворами мочевины или хлористого гуанидина. После дезагрегации в первом случае постепенно нейтрализуют раствор, во втором - удаляют пептизирующий агент сильным разведением раствора или диализом.

Мочевина и хлористый гуанидин в соответствующих концентрациях наиболее полно развертывают белковую глобулу и вместе с тем препятствуют вторичным межмолекулярным взаимодействиям. В связи в этим ренативацию белка легче всего удается получить после его денатурации мочевиной или хлористым гуани-дином. Эти два денатуратора чаще всего используются при изучении процессов развертывания и свертывания белковых глобул. Неспособность белка, агрегировавшего при денатурации, возвращаться в нативное состояние является правилом, но биологические правила и законы легко уживаются с исключениями. В данном случае таким исключением оказался ферромиоглобин моллюска Aplysia. При нагреве в солевых растворах он денатурируется, не образуя осадка, и при охлаждении раствора очень быстро возвращается в нативное состояние. В бессолевых растворах этот белок при нагреве выпадает в осадок, однако и в этом состоянии после прекращения нагрева белок так же быстро ренативируется (Brunori et al., 1968, 1972).