Метод внутренней нормализации

Экспериментальное определение калибровочных коэффициентов может проводиться двумя основными способами. Первый из них заключается в том, что в хроматограф вводят точно известные количества определяемых веществ и находят зависимость площади получающегося пика от абсолютного количества введенного в колонку вещества.

Такой способ называется методом абсолютной калибровки. Чаще применяется другой способ определения относительных калибровочных коэффициентов. Калибровочный коэффициент может быть определен как величина, показывающая, во сколько раз нужно изменить записанную площадь пика, чтобы ее доля в площади всей хроматограммы точно соответствовала истинному содержанию компонента в пробе. Для бинарной смеси определяемого вещества со стандартным, т. е. таким, для которого относительный калибровочный коэффициент принят, можно написать где  - истинное содержание определяемого компонента в бинарной смеси;  относительный калибровочный коэффициент;  площади пиков анализируемого и стандартного веществ. Решая уравнение  относительно, получим

Для бинарной смеси величина  равна истинному содержанию стандартного соединения. Отношение концентрации определяемого и стандартного соединений не изменится, если вместо  мы подставим концентрации этих компонентов в многокомпонентной смеси. Если учесть, что отношение площадей  равно отношению долей площади, т. е. хроматографических процентов, то для  можно получить выражение, удобное в практической работе: где  - соответственно истинные и хроматографические проценты определяемого и стандартного веществ. Отсюда следует, что для определения относительных калибровочных коэффициентов веществ достаточно составить смесь их со стандартным веществом, причем состав смеси должен быть известен с высокой точностью.