Трехфазный переход цитохрома

По этой же схеме идет денатурация мышечной фосфорилазы В. Первый интермедиат устойчив, при концентрации мочевины около 4 М; второй - около. 7 М (Chignell et al., 1972). Достер и Гесс (Doster, Hess, 1981) денатурировали хлористым гуанидином мышечную пируваткиназу - тетрамер с молекулярной массой 237 000. По мере повышения концентрации денатуратора процесс проходил следующие стадии: 1) в начале тетрамер расширялся; 2) при концентрации 0.9 М начинался распад на димеры, устойчивые в интервале 0.9-1.8 М, димеры утрачивали около 70% вторичной структуры; 3) начиная с концентрации 1.9 М димеры раскалывались на мономеры, лишенные вторичной структуры. Сходную картину давала мочевина. У мономеров пируваткиназы имеется по три домена. Домены не одинаковы и их разрушение происходит при разных концентрациях денатуратора.

Трехфазный переход цитохрома с был ранее обнаружен (Ikai et al., 1973) при его денатурации хлористым гуанидином. Такую же схему с двумя промежуточными продуктами дают Дрю и Дикерсон (Drew, Dickerson, 1978) для разворачивания молекул цитохрома с метанолом и кислотой. Вильяме и Свенсон (Williams, Swenson, 1981), исследуя тепловую денатурацию тропомиозина и его фрагментов в разных условиях (вариации рН и солевого состава) методом дифференциальной сканирующей калориметрии, пришли к выводу, что процесс этот многоступенчатый. Ранее к такому же выводу в отношении лизоцима пришли Бредбери и Нортон (Bradbury, Norton, 1974), использовавшие ядерномагнитный резонанс: В принципе такой комплексный процесс, как развертывание белка, должен включать большое число интермедиатов. Число их, наблюдаемое в действительности, зависит от продолжительности их жизни и от чувствительности экспериментальных методов, которые используются для их обнаружения (с. 301). К этому следует, конечно, присовокупить зависимость числа интермедиатов от природы белка и природы денатуратора. Согласно гипотезе Бургесса и Шераги (Burgess, Scheraga, 1975), термическая денатурация панкреатической рибонуклеазы приводит к поэтапному развертыванию разных районов полипептидной цепи. Однако три сегмента оказываются очень устойчивыми, и авторы считают их центрами свертывания при образовании нативной молекулы.