Средний пункт образования

В приведенных выше работах показаны двухэтапные переходы из нативного в денатурированное состояние с одним более или менее устойчивым интермедиатом, сочетающим черты и нативных, и денатурированных белковых молекул. Имеется, однако, ряд исследований, демонстрирующих случаи многофазных переходов. Так, например, ангидраза В угольной кислоты (небольшой белок с молекулярной массой 29 000, лишенный S-S-сшивок и SH-групп) проходит кислотную денатурацию в два приема: средний пункт первого перехода - при рН 4.1, второго - при рН 3. Однако на последней стадии кислотной денатурации ангидраза В все еще сохраняет значительную степень упорядоченности, которая может быть ликвидирована 6 М хлористым гуанидином (Wong, Hamlin, 1974). На этом же белке Вонг и Танфорд (Wang, Tanford, 1973) показали, что по мере увеличения концентрации хлористого гуанидина нарастающая деструкция макромолекулы проходит три этапа. Средний пункт образования первого интермедиата соответствует концентрации денатуратора 1.4 М, второго - 1.8 М; для полного развертывания требуется большая концентрация хлористого гуанидина. Миер с соавторами (Myer et al., 1980), изучая денатурацию феррицитохрома с мочевиной с помощью ряда методов, обнаружил и характеризовал два промежуточных продукта. Дезорганизация макромолекул, нарастающая по мере повышения концентрации мочевины от 0 до 9 М осуществляется по схеме NXXgD, где N и D - исходное и конечное состояние белка, X, и Х2 - интермедиа. Средние концентрации мочевины при первом, втором и третьем переходе соответственно равны 2, 6.2 и 6.9 М.