Промежуточное полуденатурированное состояние

У рибосомного белка L7L12 после денатурации нагревом (90 °С) сохраняется около 60% вторичной структуры. Кислотная денатурация (рН 1.61) вызывает более глубокую дезорганизацию и оставляет лишь 35% вторичной структуры. Если полуденатурированные продукты тепловой и кислотной денатурации подвергнуть действию хлористого гуанидина (6 М), то происходит дополнительное разрушение вторичной структуры. Таким образом, разные денатураторы доводят разрушение вторичной и третичной структуры белковой макромолекулы до разной глубины. Так, Амад и Бигелов (Ahmad, Bigelow, 1979) показали, насколько отличаются пределы дезорганизации вторичной структуры рибонуклеазы А, которые могут быть достигнуты тремя разными солями и мочевиной. Это хорошая иллюстрация к вопросу о специфических чертах в денатурации, вызванной разными агентами.

В серии работ Тсонг с соавторами (Tsong et al., 1971; Tsong, Baldwin, 1972a, 1972b; Tsong, 1973), применяя методы быстрой кинетики, на ряде белков (рибонуклеаза А, химотрип-синоген, феррицитохром с) при действии разных денатураторов обнаружил начальную быструю фазу (миллисекунды), являющуюся этапом в развертывании макромолекул.

С концепцией двух состояний трудно совместить следующий факт: эластаза не способна инактивировать фосфоэнолпиру-ваткарбоксилазу; 1М мочевина лишь на 20 % снижает активность этого фермента; однако в присутствии 1М мочевины эластаза быстро его инактивирует (Kameshita et al., 1979). Ясно, что в этой концентрации мочевина лишь частично разрыхляет макромолекулу фермента.