Первичная структура белка

При полной ренативации полученный продукт неотличим от нативного белка, но чаще, совпадая с нативным белком по одним параметрам, он может расходиться с ним по другим. Строгим критерием полной или частичной ренативации наряду с восстановлением биологической активности белка служит возвращение его исходной устойчивости к гидролитическому действию протеиназ. Протеиназы крайне чувствительны к нарушениям порядка в конформации своего субстрата - белковой макромолекулы. В качестве иллюстрации к сказанному можно привести следующие примеры. Сывороточный альбумин, денатурированный нагревом и ренативированный с помощью гидростатического давления в 2000 кгсм2, по вязкости, оптическому вращению и устойчивости к перевариванию трипсином не отличался от нативного белка (Тонгур, Казмина, 1950). При ренативации не все свойства возвращаются к норме синхронно. У а-амилазы Bacillus subtilis, денатурированной мочевиной, сразу после удаления мочевины нормализуются спектр поглощения и оптическая активность, свидетельствующие о восстановлении трехмерной структуры, и на 20-40% возобновляется активность фермента. Затем постепенно, в течение 6 ч, активность а-амилазы возрастает до 60-90% и параллельно с этим восстанавливается устойчивость к протеиназе (Fukushi, 1968). Сходные данные получены при ренативации эно-лазы, денатурированной мочевиной (Salvato et al., 1980), и аспартазы, денатурированной хлористым гуанидином (Tokushige et al., 1977).

Многочисленные факты, показывающие асинхронность регенерации разных параметров белковой макромолекулы при возвращении денатурированного белка в нативное состояние, а также случаи частичного восстановления нормальной структуры белковой макромолекулы показывают, что ренативация белка может не следовать схеме двух состояний: нативный денатурированный.